在制藥潔凈車(chē)間中新型過(guò)氧乙酸殺芽孢劑的應(yīng)用研究

潔凈車(chē)間的主要功能為室內(nèi)污染控制，在藥品、醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)、醫(yī)院等對(duì)污染有非常嚴(yán)格控制要求的領(lǐng)域，潔凈車(chē)間發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。如果沒(méi)有潔凈車(chē)間，那些對(duì)污染敏感的產(chǎn)品不可能批量生產(chǎn)，高感染風(fēng)險(xiǎn)的手術(shù)也無(wú)法實(shí)施。潔凈車(chē)間一般通過(guò)高效空氣過(guò)濾( HEPA)將空氣中的微小顆粒物、微生物過(guò)濾掉，為室內(nèi)提供“潔凈”的空氣，并通過(guò)維持室內(nèi)外一定的壓差，使室外潔凈級(jí)別較低的空氣無(wú)法輕易進(jìn)入室內(nèi)。此外，進(jìn)出潔凈車(chē)間的人員必須嚴(yán)格遵循更衣程序，以避免帶入污染。盡管如此，即便是潔凈等級(jí)最高的潔凈車(chē)間，也依然面臨微生物污染的威脅，需要有一套有效的清潔消毒方法來(lái)應(yīng)對(duì)微生物問(wèn)題…。制藥企業(yè)在建立清潔消毒方法的時(shí)候，都會(huì)對(duì)如何選擇消毒劑、如何正確使用消毒劑、如何開(kāi)展相關(guān)驗(yàn)證存在一些疑惑。本丈通過(guò)查閱潔凈車(chē)間衛(wèi)生消毒相關(guān)的文獻(xiàn)，結(jié)合國(guó)內(nèi)外相關(guān)法規(guī)要求和殺芽孢劑選擇原則，分析和介紹了過(guò)氧乙酸殺芽孢劑的特點(diǎn)和在制藥潔凈車(chē)間消毒應(yīng)用中的優(yōu)勢(shì)及注意事項(xiàng)等。

1制藥企業(yè)衛(wèi)生消毒方案

制藥企業(yè)所建立的衛(wèi)生消毒方案中，往往需要輪流使用2種以上消毒劑，主要基于以下考慮：

  1)微生物種類(lèi)多、差異大，大部分常見(jiàn)的消毒劑并不能對(duì)所有類(lèi)型微生物都具有殺滅能力。尤其是能生成芽孢的細(xì)菌，必須用專(zhuān)門(mén)的殺芽孢消毒劑（亦稱(chēng)為高效消毒劑）才能徹底殺滅，而常規(guī)消毒劑只能部分殺滅其繁殖體，對(duì)芽孢是沒(méi)有效果的：

  2)殺菌能力強(qiáng)的消毒劑往往使用成本相對(duì)較高，因此很多生產(chǎn)企業(yè)在消毒方案中采用一種相對(duì)廣譜的普通消毒劑用于日常消毒（每天或每周使用一次），然后用殺芽孢劑進(jìn)行定期清場(chǎng)（每周或每月使用一次），這樣可以降低殺芽孢劑的使用成本。當(dāng)然，每個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的環(huán)境與工況不可能完全相同，因此具體的使用頻率需要結(jié)合環(huán)境微生物監(jiān)控與鑒定的結(jié)果進(jìn)行分析和調(diào)整。

  3)無(wú)論是美國(guó)、歐盟、還是中國(guó)的GMP法規(guī)都要求消毒劑的種類(lèi)必須多于一種，目的是降低長(zhǎng)期使用單一消毒劑導(dǎo)致微生物出現(xiàn)耐藥性的風(fēng)險(xiǎn)。盡管微生物出現(xiàn)耐藥性的現(xiàn)象主要是針對(duì)抗生素而言，迄今并沒(méi)有有力的證據(jù)表明微生物對(duì)消毒劑也會(huì)產(chǎn)生“耐藥性”，但作為CMP法規(guī)的強(qiáng)制性規(guī)定，企業(yè)是必須遵循的

2消毒劑的類(lèi)型

  不同類(lèi)型的消毒劑其殺菌機(jī)理、殺菌譜、功效強(qiáng)弱都有差異。有些消毒劑只是起到抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的作用；有些消毒劑能夠破壞細(xì)菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而起到殺滅作用；而有些消毒劑不僅能夠破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，還能滅活細(xì)菌芽孢。芽孢是潔凈車(chē)間內(nèi)最難以去除的微生物威脅：芽孢致密的多肽外殼便其對(duì)消毒劑具有極強(qiáng)的抗性，常見(jiàn)的親水性消毒成分很難滲入芽孢內(nèi)部發(fā)揮作用。芽孢生命力極強(qiáng)，在潔凈車(chē)間內(nèi)干燥、缺乏營(yíng)養(yǎng)的環(huán)境中仍然能長(zhǎng)期存活，一旦條件適宜，芽孢就能重新變成細(xì)菌繁殖體，給環(huán)境、產(chǎn)品造成污染：但需要強(qiáng)調(diào)的是，界定“消毒劑”并不需要把能否殺滅芽孢作為標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)檫@是更高的要求。一款產(chǎn)品只要能證明對(duì)細(xì)菌、真菌或病毒等達(dá)到一定的殺滅程度，就可以被認(rèn)定為消毒劑

 潔凈車(chē)間常用的消毒劑分為兩大類(lèi)：一類(lèi)是非氧化型消毒劑，以醇類(lèi)、季銨鹽類(lèi)為代表；另一類(lèi)是氧化型消毒劑，如過(guò)氧乙酸、二氧化氯、次氯酸鹽等。非氧化型消毒劑一般不具備殺滅芽孢的能力，而氧化型消毒劑中有不少殺芽孢劑。

3殺芽孢劑的選擇原則

  殺芽孢劑在殺菌能力方面無(wú)疑是最強(qiáng)效的，但它們也可能會(huì)給人員健康、使用安全帶來(lái)更多負(fù)面影響，因此必須謹(jǐn)慎選擇。以下列舉了為潔凈車(chē)間選擇殺芽孢劑時(shí)通常需要考慮的方面：

  1)殺菌接觸時(shí)間越短越好，最好不要超過(guò)10min。接觸時(shí)間是指殺芽孢劑必須保留在消毒表面上的時(shí)間，即消毒后至恢復(fù)生產(chǎn)前的等待時(shí)間。

  2)有些殺芽孢劑對(duì)使用溫度、pH值的范同有要求，如果超過(guò)了會(huì)影響其殺菌功效    3) GMP法規(guī)[2-4]規(guī)定周于A、B級(jí)潔凈車(chē)間內(nèi)的消毒劑必須是無(wú)菌的。如果殺芽孢劑的成分在經(jīng)過(guò)伽馬射線輻照或除菌過(guò)濾后殺菌功效降低較多的，不宜用于A/B級(jí)潔凈車(chē)間。

  4)有些企業(yè)在消毒前會(huì)先用清潔劑做清潔，由于清潔劑可能會(huì)影響到后續(xù)消毒劑的殺菌功效，因此需要考察殺芽孢劑與所用的清潔劑之間的相容性。

  5)盡管沒(méi)有絕對(duì)安全的消毒劑，我們還是應(yīng)該盡量選擇那些對(duì)人員、環(huán)境相對(duì)更安全的產(chǎn)品。

  6)必須重視殺芽孢劑與潔凈車(chē)間內(nèi)各種表面材質(zhì)的相容性，避免出現(xiàn)材質(zhì)腐蝕、變色的情況。例如，含氯的殺芽孢劑對(duì)不銹鋼等材質(zhì)的影響比較明顯，會(huì)造成變色、腐蝕等。如果選擇此類(lèi)型的殺芽孢劑，在消毒后注意用無(wú)菌的水或醇將表面的殺芽孢劑殘留擦拭干凈。

  7)由于要穿著防護(hù)嚴(yán)密的潔凈服，人員在潔凈車(chē)間內(nèi)進(jìn)行消毒并不是一件輕松的工作，因此殺芽孢劑產(chǎn)品的易用性也是需要考慮的因素？有些殺芽孢劑使用前需要將兩種組分先混合，混合液一般有效期比較短，不能繼續(xù)儲(chǔ)存，使用起來(lái)并不方便。比較理想的方式是同一種殺芽孢劑既有濃縮型（能夠根據(jù)需要稀釋后用于大面積的表面擦拭消毒），又有即用型（配有噴頭，直接對(duì)小面積表面進(jìn)行噴灑消毒）。

  8)市售的消毒劑產(chǎn)品如果宣稱(chēng)能殺芽孢的，供應(yīng)商應(yīng)該能侈提供測(cè)試報(bào)告，以證明其對(duì)芽孢的殺滅對(duì)數(shù)值達(dá)到官方認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)。

4過(guò)氧乙酸殺芽孢劑在制藥潔凈車(chē)間消毒中的應(yīng)用

  制藥企業(yè)對(duì)潔凈車(chē)間內(nèi)出現(xiàn)芽孢污染都是非常重視的，也是微生物監(jiān)控的重點(diǎn)。傳統(tǒng)的控制手段是通過(guò)甲醛熏蒸、臭氧消毒等空間滅菌的方式來(lái)處理，現(xiàn)在也有一些更環(huán)保的新技術(shù)如過(guò)氧化氫蒸氣滅菌可以殺滅沽凈室內(nèi)的芽孢。但空間熏蒸的方式畢竟是一劑“猛藥”，殺菌的同時(shí)也會(huì)帶來(lái)環(huán)保、安全與材質(zhì)腐蝕等問(wèn)題，并不適于高頻使用?，F(xiàn)在越來(lái)越多的制藥企業(yè)開(kāi)始重視通過(guò)日常使用殺芽孢劑來(lái)降低環(huán)境中出現(xiàn)芽孢的幾率，從而減少對(duì)于空間滅菌方式的依賴(lài)。常見(jiàn)的殺芽孢劑有次氯酸鹽（如84消毒液）、二氧化氯、高濃度的雙氧水、過(guò)氧乙酸等。其中過(guò)氧乙酸在歐洲是殺芽孢劑應(yīng)用的主流趨勢(shì)，它能快速殺滅各種類(lèi)型的微生物。此外，過(guò)氧乙酸殺芽孢劑安全性好、無(wú)殘留，很適合潔凈車(chē)間的環(huán)境要求。

4.1過(guò)氧乙酸殺芽孢劑的特點(diǎn)

  過(guò)氧乙酸屬于氧化性消毒劑，與傳統(tǒng)的氧化性消毒劑次氯酸鹽、二氧化氯等含氯殺芽孢劑相比，過(guò)氧乙酸是一種新型的殺芽孢劑。過(guò)氧乙酸由過(guò)氧化氫與醋酸反應(yīng)生成，其溶液中一般都含有過(guò)氧乙酸、過(guò)氧化氫和醋酸，其中過(guò)氧乙酸是主要的殺菌活性成分㈣，它通過(guò)氧化微生物外層細(xì)胞膜使微生物快速失去活性，過(guò)氧乙酸能夠滲透芽孢的多肽外殼破壞芽孢內(nèi)部的大分子如糖類(lèi)、核酸、脂質(zhì)等，最終造成細(xì)胞裂解和死亡。市售的過(guò)氧乙酸殺芽孢劑產(chǎn)品中過(guò)氧乙酸含量一般為5 %—15%。

  過(guò)氧乙酸消毒劑非常適合潔凈車(chē)間的使用環(huán)境，主要體現(xiàn)在：

  1)在潔凈車(chē)間內(nèi)室溫或低溫條件下，過(guò)氧乙酸消毒液的活性不會(huì)降低。

  2)過(guò)氧己酸消毒液與潔凈車(chē)間內(nèi)常見(jiàn)材質(zhì)的相容性好，對(duì)不銹鋼不會(huì)造成腐蝕。

  3)過(guò)氧乙酸的殺菌活性不僅不受有機(jī)物的影響，而且能有效去除表面的有機(jī)物殘留。

  4)過(guò)氧乙酸消毒液使用安全性好，人員在配制時(shí)不需要采取特殊的防護(hù)措施，常規(guī)穿戴即可。

  5)過(guò)氧乙酸消毒液既有濃縮型產(chǎn)品供稀釋用于大面積表面消毒，也有穩(wěn)定的即用型產(chǎn)品用于小面積表面消毒。

  6)過(guò)氧乙酸可分解揮發(fā)，消毒后表面無(wú)殘留。分解產(chǎn)物為水、氧氣和二氧化碳，沒(méi)有有害的分解產(chǎn)物。

  與含氯殺芽孢劑相比較，過(guò)氧乙酸殺芽孢劑在材質(zhì)相容性、殘留、穩(wěn)定性和人員安全性方面均有明顯優(yōu)勢(shì)，更適合潔凈車(chē)間環(huán)境使用。

4.2過(guò)氧乙酸殺芽孢劑在使用中的注意事項(xiàng)

  1)過(guò)氧乙酸消毒劑其主要活性成分過(guò)氧乙酸、過(guò)氧化氫都存在分解的趨勢(shì)。為了盡可能延長(zhǎng)過(guò)氧乙酸消毒劑的保質(zhì)期與使用期，制造商都會(huì)有自己關(guān)鍵的穩(wěn)定技術(shù)。盡管使用者很難知道穩(wěn)定技術(shù)的細(xì)節(jié)，但可以通過(guò)產(chǎn)品所宣稱(chēng)的保質(zhì)期了解其穩(wěn)定性?xún)?yōu)劣。例如兩種過(guò)氧乙酸殺芽孢劑，其活性成分濃度相當(dāng)，其中一種的保質(zhì)期為12個(gè)月，另外一種為18～24個(gè)月，那么顯然保質(zhì)期長(zhǎng)的產(chǎn)品在使用中穩(wěn)定性會(huì)更好一些。此外，有些企業(yè)在采購(gòu)過(guò)氧乙酸消毒劑后，會(huì)通過(guò)企業(yè)自襝建立內(nèi)控指標(biāo)，自檢時(shí)往往出現(xiàn)過(guò)氧乙酸、過(guò)氧化氫的含量低于制造商所提供的出廠檢驗(yàn)值，這也是由于成分的分解導(dǎo)致的，穩(wěn)定技術(shù)只能延緩分解的速率。一般制造商都會(huì)提供一個(gè)最低有效濃度值，企業(yè)自檢只要能高于最低有效濃度值，那么該產(chǎn)品仍在有效期之內(nèi)。

  2)過(guò)氧乙酸消毒液的pH值很低，使用時(shí)應(yīng)該避免接觸鐵、鋅、銅等軟性金屬，鋁材雖然耐受性要好一些，但也不宜長(zhǎng)時(shí)間接觸。

  3)過(guò)氧乙酸消毒液分解產(chǎn)物之一為醋酸，有刺激性氣味，在潔凈車(chē)間相對(duì)密閉的空間內(nèi)大量使用時(shí)可能會(huì)刺激使用人員的呼吸道，因此使用人員除了要戴口罩做好自身防護(hù)之外，最好能合理安排消毒區(qū)域，減少連續(xù)作業(yè)的時(shí)間。

  4)過(guò)氧乙酸消毒劑能夠快速殺滅芽孢，但是對(duì)霉菌的殺滅效果相對(duì)要弱一些，往往需要提高使用濃度或延長(zhǎng)接觸時(shí)間才能殺滅霉菌。

4.3過(guò)氧乙酸殺芽孢劑的相關(guān)驗(yàn)證

  消毒劑相關(guān)的驗(yàn)證包括殺菌效力驗(yàn)證與清潔驗(yàn)證（殘留考察）。殺菌效力驗(yàn)證一般包含實(shí)驗(yàn)室殺菌效力測(cè)試（懸液法或載體法）、現(xiàn)場(chǎng)考察、日常監(jiān)控”踟。實(shí)驗(yàn)室殺菌測(cè)試最好選擇載體噴霧殺菌實(shí)驗(yàn)，一方面可以用潔凈車(chē)間內(nèi)不同的材質(zhì)做成載體，考察材質(zhì)對(duì)殺菌效力的影響；另一方面載體噴霧法比懸液法或載體浸泡法更右挑戰(zhàn)性，也更貼近于實(shí)際使用的情況。我國(guó)出版的《消毒技術(shù)規(guī)范》，《無(wú)菌制劑CMP實(shí)施指南》中都能找到相關(guān)的實(shí)驗(yàn)方法。

  國(guó)外普遍認(rèn)為過(guò)氧乙酸殺芽孢劑是無(wú)殘留的，但國(guó)內(nèi)制藥企業(yè)對(duì)此比較謹(jǐn)慎。要考察殘留，最關(guān)鍵的是建立一種檢測(cè)限足夠低、操作性強(qiáng)的過(guò)氧乙酸／過(guò)氧化氫殘留檢測(cè)方法。目前有一些商用檢測(cè)測(cè)試條最低能檢測(cè)出0.5 ppm的過(guò)氧乙酸／過(guò)氧化氫，而且操作性比使用HPLC、GC-MS等儀器分析手段要簡(jiǎn)單方便得多，比較符合制藥企業(yè)殘留檢測(cè)的要求。

5小結(jié)

  消毒劑對(duì)于潔凈車(chē)間的微生物污染控制而言是非常重要的，但如何選擇和使用好消毒劑并不是簡(jiǎn)單的事情。定期使用殺芽孢劑是潔凈車(chē)間消毒計(jì)劃中一項(xiàng)關(guān)鍵原則。由于過(guò)氧乙酸殺芽孢劑具有操作方便、安全性好、無(wú)殘留、材質(zhì)相容性好、殺菌效果顯著等優(yōu)點(diǎn)，非常適合制藥潔凈車(chē)間的消毒使用。